atp熒光檢測(cè)儀有兩個(gè)單色器，激發(fā)單色器（第一單色器）和熒光單色器（第二單色器）。第一個(gè)單色器的作用是將不需要的光除去，使需要的激發(fā)光透過(guò)而照射到樣品池，第二個(gè)濾光片將由激發(fā)光所發(fā)生的反射光、瑞利散射光、拉曼散射光和由溶液中雜質(zhì)所發(fā)生大多數(shù)的熒光濾去。濾光片熒光計(jì)采用濾光片做單色器，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，用于已知組分樣品的定量分析，不能提供激發(fā)光譜或熒光光譜。熒光分光光度計(jì)都采用光柵分光，可以獲得單色性好的激發(fā)光，并能分出某一波長(zhǎng)的熒光，以減少干擾，而且可以掃描激發(fā)光譜或熒光光譜。

熒光光譜儀由激發(fā)光源、單色器、狹縫、樣品室、信號(hào)檢測(cè)放大系統(tǒng)和信號(hào)讀出、記錄系統(tǒng)組成。激發(fā)光源提供用于激發(fā)樣品的入射光的來(lái)源。單色器用來(lái)分離出所需要的單色光。信號(hào)檢測(cè)放大系統(tǒng)用來(lái)把熒光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，結(jié)合放大系統(tǒng)上的讀出裝置可顯示或記錄熒光信號(hào)。

一.激發(fā)光源

因?yàn)槲镔|(zhì)的熒光強(qiáng)度與激發(fā)光的強(qiáng)度成正比，因此一種理想的激發(fā)光源必須具備穩(wěn)定的光強(qiáng)、足夠的強(qiáng)度和在所需光譜范圍內(nèi)有連續(xù)的光譜，此外激發(fā)光源的輸出還應(yīng)是連續(xù)平滑等強(qiáng)度的輻射。當(dāng)然，這是理想化的光源，符合這些要求的光源實(shí)際上并不存在。通常儀器的激發(fā)光源主要采用氙燈、汞燈、氙-汞弧燈、激光器以及閃光燈。高壓氙弧燈是應(yīng)用*廣泛的一種光源。

熒光光譜儀所用的激發(fā)光源為450W氙燈，這是一種短弧氣體放電燈。該燈外套為石英，里面充氙氣，室溫時(shí)其壓力為5atm，工作時(shí)壓力約為20atm,氙燈的激發(fā)光譜在250～800nm呈連續(xù)光譜，在450nm附近有幾條銳線。

工作時(shí)，燈內(nèi)相距約8mm的鎢絲間會(huì)形成強(qiáng)的電子流(電弧)，氙原子與其碰撞后會(huì)離解為氙正離子，氙正離子與電子結(jié)合就會(huì)發(fā)光。氙原子的離解發(fā)射連續(xù)光譜，而激發(fā)態(tài)的氙會(huì)發(fā)射位于450nm附近的線狀光譜。工作的時(shí)候，氙燈發(fā)射出很強(qiáng)的燈光，其射線會(huì)損傷眼睛視網(wǎng)膜，紫外線會(huì)損傷肉眼角膜，因此操作者應(yīng)避免直視光源。

二.單色器

光柵和濾光片都可以作為單色器。目前，現(xiàn)代精密的熒光光譜儀均用光柵分光器作為單色器(簡(jiǎn)稱光柵單色器)，單色器部分均帶有可調(diào)的狹縫，用以選擇合適的通帶。Fluorolog-3型熒光光譜儀狹縫的可調(diào)范圍通常設(shè)為1～5nm。

1．光柵

光柵單色器有兩個(gè)性能評(píng)價(jià)指標(biāo)：色散能力和雜散光水平。通常，色散能力以nm/mm表示，其中mm為單色器的狹縫寬度。單色器的雜散光指標(biāo)是一個(gè)極其關(guān)鍵的參數(shù)。雜散光是指除去所需要波長(zhǎng)的光線以外，通過(guò)單色器的所有其他光線的強(qiáng)度。選用低雜散光的單色器可以減少雜散光的干擾，同時(shí)選用**率的光柵單色器可以提高檢測(cè)弱信號(hào)的能力。普通光柵單色器都有進(jìn)光和出光兩個(gè)狹縫，出射光的強(qiáng)度與光柵狹縫寬度的平方成正比。因此，適當(dāng)?shù)卦龃螵M縫寬度有利于提高信號(hào)強(qiáng)度，但同時(shí)也會(huì)降低信號(hào)的分辨能力。而縮小狹縫寬度會(huì)有利于提高光譜分辨力，但卻犧牲了信號(hào)強(qiáng)度。因此，為保證測(cè)試的真實(shí)性，針對(duì)具體的測(cè)試體系，狹縫的調(diào)節(jié)一般從小到大。另外，對(duì)于光敏性的熒光體在測(cè)量的時(shí)候有必要適當(dāng)減少入射光的強(qiáng)度。通常激發(fā)單色器發(fā)出的紫外線用來(lái)激發(fā)熒光體，而氙燈中的紫外線強(qiáng)度很弱，僅約為可見(jiàn)光的1％。普通熒光物質(zhì)的熒光一般都很弱，所以通過(guò)激發(fā)單色器的長(zhǎng)波長(zhǎng)的雜散光很容易被當(dāng)作熒光來(lái)檢測(cè)。例如，對(duì)于許多濁度較大的生物樣品，入射的雜散光被其散射后就會(huì)干擾熒光強(qiáng)度的測(cè)量。因此，有些熒光光譜儀采用雙光櫥單色器，這樣雜散光可降至峰強(qiáng)度的10-8～10-12,但是其靈敏度也將降低。

光柵單色器的透射率是波長(zhǎng)的函數(shù)，定義機(jī)刻光柵的**輸出光的波長(zhǎng)為閃耀波長(zhǎng)。光柵的閃耀波長(zhǎng)是由光柵的閃耀角決定，而閃耀角由光柵的線槽角決定。為彌補(bǔ)激發(fā)光源(氮燈)紫外區(qū)能量弱的缺點(diǎn)，熒光光譜儀多選用閃耀波長(zhǎng)在紫外區(qū)(如300mn)的單色器為激發(fā)單色器。由于熒光化合物的發(fā)射波長(zhǎng)多分布在400～600nm，因而發(fā)射單色器常采用閃耀波長(zhǎng)為500nm左右的光柵。此外，光柵單色器的透射率與偏振光有關(guān)。

2.濾光片

消除來(lái)自雜散光和散射光的熒光測(cè)量的主要誤差，還可以用濾光片。濾光片價(jià)格便宜、構(gòu)造簡(jiǎn)單，因此它在熒光光譜儀中得到廣泛應(yīng)用。常用濾光片可分為玻璃濾光片、膠膜濾光片和干涉濾光片三種。該儀器使用的是玻璃濾光片。玻璃濾光片因?yàn)楹胁煌慕饘傺趸锒尸F(xiàn)不同的顏色。它們透過(guò)的光線帶寬較寬，而且因受金屬氧化物種類(lèi)的限制，品種不多。但它價(jià)格便宜，又具有穩(wěn)定、經(jīng)得起長(zhǎng)期光照等優(yōu)點(diǎn)。

三.檢測(cè)器

檢測(cè)器的種類(lèi)很多，主要有光電倍增管(photomultiplier-tube, PMT)、光導(dǎo)攝像管、電子微分器和電荷耦合器件陣列檢測(cè)器。目前，幾乎所有熒光光譜儀都采用PMT作為檢測(cè)器。PMT是一種具有**靈敏度和超快時(shí)間響應(yīng)的將微弱光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào)的真空電子器件，可用于光探測(cè)器件。在一定的條件下，其輸出電流量與入射光強(qiáng)度成正比。檢測(cè)器R928P PMT在真空管中包括光陰極和聚焦電極、電子倍增極和電子收集極(陽(yáng)極)，根據(jù)光電子發(fā)射、多級(jí)的二次發(fā)射電極和電子光學(xué)的原理制成。光陰極在光子作用下會(huì)引起一次電子發(fā)射，這些光電子在真空管中被外電場(chǎng)加速，聚焦飛射到第一個(gè)二次發(fā)射極。這些沖擊次級(jí)電極的光電子會(huì)使次極電極釋放更多電子(5～20個(gè))發(fā)生二次電子發(fā)射，這些電子又被加速并聚焦在下一個(gè)電極上去，這樣重復(fù)多次，一般經(jīng)過(guò)10次以上的倍增，放大倍數(shù)可達(dá)到108～1010，*后電子被集中到高電位的陽(yáng)極上去，所產(chǎn)生的光電流就被放大到可檢測(cè)的水平。PMT的光電子產(chǎn)生率與施加于光陰極的高壓值的大小有關(guān)。一般PMT常用-500～-1000 V的電壓，有些PMT則用-1000～-2000V。電壓越高，每個(gè)二次電極發(fā)射的電子越多，因此PMT本身的放大作用就越大。

光導(dǎo)攝像管是用來(lái)作為光學(xué)多通道分析器的檢測(cè)器。它具有動(dòng)態(tài)范圍寬、檢測(cè)效率高、線性響應(yīng)好、堅(jiān)固耐用和壽命長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，盡管檢測(cè)靈敏度不如PMT，但它能同時(shí)接受熒光物質(zhì)的整個(gè)發(fā)射光譜，更有利于光敏性和復(fù)雜樣品的分析。電荷耦合器件陣列檢測(cè)器是一類(lèi)新型的光學(xué)多通道檢測(cè)器，具有靈敏度高、噪聲低、光譜范圍和線性范圍寬、暗電流小、量子效率高，還可獲取彩色、三維圖像等特點(diǎn)。CCD檢測(cè)器是一種靈敏的固體成像裝置，一般其有效成像面積為1～8cm[1，2] 。

四.讀出裝置

早期atp熒光檢測(cè)儀的讀出裝置有數(shù)字電壓表、記錄儀(x-y或x-t型)和陰極示波器等幾種?，F(xiàn)在隨著計(jì)算機(jī)軟硬件技術(shù)的發(fā)展可以根據(jù)需求選擇不同的直觀讀出方式。